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影響抗原-抗體特異性結(jié)合的因素包括:
1、酸堿度:抗原抗體特異性結(jié)合的*適酸堿度pH 6.0-8.0;
2、電解質(zhì):電解質(zhì)可以影響溶液pH,也可影響蛋白質(zhì)的等電點(diǎn);(因此,WB的洗膜緩沖液,均用PBS/PBST或TBS/TBST等平衡鹽液體,抗體稀釋液和封閉液也多是上述液體配置,是為了保證抗原抗體反應(yīng)的*條件)。
3、溫度:一般為15-40℃,*適為37℃;(常用的一抗孵育時(shí)間為:室溫,2-3h;二抗孵育時(shí)間:室溫,1h。此外,4℃*封閉也應(yīng)用廣泛,這與抗原抗體反應(yīng)的反應(yīng)特點(diǎn)有關(guān),涉及抗原抗體的結(jié)合率)。
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