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幾種常用細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品:
⒈ BME(basal medium eagle)基礎(chǔ)伊格培養(yǎng)基
⒉ MEM
⒊ DMEM
⒋ IMDM
⒌ RPMI-1640
⒍ M199
⒎ Mccoy's 5A
⒏ F10 F12 DMEM混合F12(三)幾種常用細(xì)胞培養(yǎng)配套試劑的配置(緩沖液、平衡鹽溶液等)
1)、無(wú)鈣、鎂、離子溶液(1000ml)
氯化鈉(NaCl)8g磷酸二氫鈉、(NaH2PO4H20)0.05g、氯化鉀(KCl)0.2g、碳酸氫鈉(NaHCO3)1g、檸檬酸三鈉(Na3C6H5O7,H20)1g、葡萄糖1g、加去離子水或雙蒸水至1000mL
2)、PBS(Phosphate-Buffered saline)磷酸鹽緩沖液
甲液:0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液、磷酸氫二鈉(無(wú)水)28.4g、氯化鈉8.77g加去離子水或雙蒸水至1000mL
乙液:0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液、磷酸二氫鈉(無(wú)水)2.4g、氯化鈉8.77g加去離子水或雙蒸水至1000mL
甲、乙液于4℃保存,使用時(shí)按表3-2所示比例,配制成所需pH濃度,高壓滅菌后室溫保存。
3)、Hanks液(HBSSHank's Balanced salt solution)
⑴母液甲(20x)配法
①NaCl(A.R)160g、KCl(A.R)8g、MgSO4.7H2O(A.R)2g、MgCl.6H2O(A.R)2g依次溶于800mL雙蒸水中,前一物質(zhì)溶后再加后一種。
②CaCl2(A.R)2.8g溶于100mL雙蒸水中,溶時(shí)不斷攪拌(此液應(yīng)單配,單溶)。
待上述兩溶液中的"溶質(zhì)"全溶后,將它們混合,再用雙蒸水補(bǔ)至1000mL,向其中加2mL氯仿作為防腐劑,置4℃保存。
⑵母液乙(20×)配法
①Na2HPO4.12H2O(A.R)3.04g、KH2PO4(A.R)1.20g、葡萄糖(A.R)20.0g溶于800ml雙蒸水中。
②0.4%酚紅液0.4g酚紅放在玻璃研缽后加0.01N、NaOH11.28mL,直到全部溶解,移入100mL容量瓶中,加水至100mL,過(guò)濾,pH為7.4,4℃保存。
待上述各"溶質(zhì)"完全溶解后,用雙蒸水補(bǔ)至1000mL,其中加氯仿2mL作防腐劑,置40℃保存。
(3)使用液(1×)配法
取母液甲和母液乙各一份,加雙蒸水18份,分裝后,塞好瓶塞,掛上標(biāo)志。以115℃高壓滅菌25分鐘(以免葡萄糖破壞),置室溫后4℃保存,可使用幾個(gè)月。臨用前,用7.5%NaHCO3調(diào)至所需pH。
4)、Eagle's液(EBSSEagle's Balanced salt solution)
是一種在二氧化碳(CO2)環(huán)境中短期維持細(xì)胞活性的平衡鹽溶液,可用于細(xì)胞解離前的清洗、細(xì)胞或組織的運(yùn)輸、細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)稀釋、溶液的配置等。
5)、HEPES液
生物緩沖液,化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,在PH7.2~7.6范圍內(nèi),比NaHCO3緩沖液的緩沖能力更強(qiáng)。
6)、NaHCO3緩沖液
常規(guī)緩沖體系的一部分,但是不穩(wěn)定,易受空氣中CO2的含量而改變PH值,影響緩沖效果。
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