采用TSKgel G5000PWXL色譜柱分離重組SARS-CoV-2 S蛋白

SARS-CoV-2屬于冠狀病毒科、β冠狀病毒屬，是一種球形、有包膜的單正鏈RNA病毒。主要編碼4種結(jié)構(gòu)蛋白：刺突糖蛋白 (spike glycoprotein, S蛋白)、包膜蛋白 (envelope protein, E蛋白)、膜蛋白 (membrane protein, M蛋白)、核衣殼蛋白 (nucleocapsid protein, N蛋白)。

S蛋白是*冠狀病毒*重要的表面蛋白，是中和病毒感染抗體的主要靶點(diǎn)，也是疫苗設(shè)計(jì)的核心免疫原成分。S蛋白由S1和S2亞基組成，其中白受體結(jié)合域 (RBD) 位于S1亞基。本篇應(yīng)用是對(duì)昆蟲細(xì)胞中表達(dá)并純化得到的重組SARS-CoV-2 S蛋白及片段S1蛋白和RBD蛋白進(jìn)行高效尺寸排阻色譜 (HPSEC) 的分離和表征。

樣品制備  

重組SARS-CoV-2 S蛋白及片段S1蛋白、RBD蛋白參考方法制備。

分析條件  

色譜柱：TSKgel G5000PWXL (10μm, 7.8 mmI.D.×30 cm)

流動(dòng)相：10 mM PB (pH 7.4)

流速：0.5 mL/min

柱溫：室溫

檢測(cè)器參數(shù)：UV@280 nm

樣品：重組S蛋白及S1蛋白、RBD蛋白

分析結(jié)果  

結(jié)果與討論  

采用高效凝膠色譜柱TSKgel G5000PWXL對(duì)純化后重組SARS-CoV-2 S蛋白及片段RBD、S1溶液進(jìn)行了分離。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：該色譜柱可有效實(shí)現(xiàn)純化后重組SARS-CoV-2 S蛋白、S1蛋白及RBD蛋白的分離。RBD、S1和S在洗脫體積分別為9.0 mL、5.5 mL和5.3 mL的HPSEC譜圖上均顯示一個(gè)主峰。