操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及*濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（完全培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（完全培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供*價(jià)格、說(shuō)明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

中文名稱：Bafilomycin A1 (自噬抑制劑，質(zhì)子泵抑制劑)

英文名稱：Bafilomycin A1

產(chǎn)品規(guī)格：100 μg

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

5989-81-1a-乳糖;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 規(guī)格： 0.25g

15121-94-5櫻草素 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

464-74-4蟾精 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

126223-28-7人參皂苷 Rg4 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

55395-07-8寶藿苷II；大花羊藿苷A；意卡瑞苷A 規(guī)格： HPLC≥98%;5mg

156294-36-9Larotaxel 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

42294-03-1甘草酸單鉀鹽 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

83-79-4魚藤 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

35833-62-63-乙酸南美楝屬二醇酯 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg

7374-79-0無(wú)梗五加苷B 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

a四氫姜黃素 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

174284-20-9芹菜素-7-0-（2G-鼠李糖）龍膽糖苷 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg

Bafilomycin A1 (自噬抑制劑，質(zhì)子泵抑制劑)小鼠巨噬細(xì)胞來(lái)源趨化因子(MDC)ELISA試劑盒 英文名： MDC ELISA Kit 5,5'-雙(4,4,5,5-四基-1,3,2-二氧硼-2-基)-2,2'-聯(lián)吩(>98.0%(T)) 5,5'-Bis(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-2,2'-bithiophene

小鼠髓樣分化因子88(MyD88)ELISA試劑盒 英文名： MyD88 ELISA Kit S-F-L-L-R S-F-L-L-R

SIPA1L2  信號(hào)誘導(dǎo)增相關(guān)蛋白1樣蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml L-墨蝶呤 L-Sepiapterin

CK2  細(xì)胞角蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml 次*(標(biāo)準(zhǔn)品) Hypaconitine

phospho-ATF2 (Thr53)  化活化復(fù)制因子2抗體 規(guī)格: 0.1ml 香葉（標(biāo)準(zhǔn)品） Geraniol

Rabbit Anti-Guinea pig IgG/FITC  FITC標(biāo)記的兔抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.3ml 氟喹 Flumequine

CYP21  膽固21-羥化酶抗體 規(guī)格: 0.2ml 枸櫞米芬,克羅米芬 Clomiphene citrate

人β-1,3-半乳糖轉(zhuǎn)移酶1(β3GALT1)ELISA試劑盒 0.312-20 ng/mL TAE684 NVP-TAE684